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H1N1亚型猪流感病毒3种谱系三重RT-PCR检测方法的建立与应用
作者: 兰德松 [1] 魏澍 [2] 侯振中 [3]
关键词: 猪流感病毒 2009甲型H1N1 古典型H1N1 类禽型H1N1 三重RT-PCR
摘要:以H1N1亚型猪流感病毒(SIV)3种主要谱系2009甲型H1N1 (pdm/09 H1N1)、古典型H1N1 (CS H1N1)和类禽型H1N1(aH1N1)的血凝素(Hemagglution,HA)基因为靶基因,设计3对特异性引物,建立一种可以同时检测一个反应体系中H1N1亚型3种主要谱系SIV的三重RT-PCR方法,并将其应用于临床样品的检测,旨在为开展猪群中流行的H1N1亚型SIV感染及流行情况的调查研究提供有力技术支撑.结果显示,该方法可对pdm/09 H1N1、CS H1N1和aH1N1这3个不同谱系SIV特异性检出,扩增片段大小分别为476 bp、293 bp和997 bp,而与其他病毒无交叉反应;最低检测限分别为1 460拷贝/μL、1 700拷贝/μL和1 950拷贝/μL;应用到3 110份临床样品检测中,检测出10株pdm/09 H1N1和21株aH1N1 SIV,未检测到CS H1N1 SIV,与鸡胚分离病毒符合率达100%.综上,该方法敏感性和特异性良好,能快速、有效实现对临床样品中H1N1亚型3种谱系的检测.